一些細(xì)胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長,但相當(dāng)一部分哺乳動物細(xì)胞需要表面貼壁,。
因此,,用于提供細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境的培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿除了具有良好的透明度和無毒,、無菌外,還需經(jīng)表面改性處理使之能夠貼壁,、分裂和生長,。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長期培養(yǎng)、傳代,、作為種子細(xì)胞,。
不易污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實驗中選用,,臨時培養(yǎng),。
培養(yǎng)面積T25約為25,T75為75,。
6孔板,、10/孔。
12孔板4/孔,。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于,,安全系數(shù)的高低、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的多少,。
個人感覺培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高,,操作也比較方便。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來做相對大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細(xì)胞,。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對照分析實驗,。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng)),。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法,。
同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶,。
具體操作步驟如下:
將長滿細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中,。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞,。
隨著時間的推移,,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化,。
觀察消化也可以用肉眼,,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。
一般室溫消化時間約為1—3分鐘,。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng),。
第二天觀察貼壁生長情況。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),,加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,,濾器過濾除菌,,4℃保存,用前可在37℃下回溫,。
胰酶溶液中也可加入EDTA,,使終濃度達0.02%。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,,底部無畸變,;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜);
設(shè)計的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn),;
側(cè)面可疊放,更有效地利用培養(yǎng)箱,;
無毒,,無DNA/RAN酶;
伽馬射線消毒滅菌,。
培養(yǎng)瓶主要分類
按細(xì)胞對產(chǎn)品的貼壁要求分為三類:
普通型適合細(xì)胞和組織的懸浮培養(yǎng),;
標(biāo)準(zhǔn)型具有良好的細(xì)胞貼壁性能,適用于細(xì)胞的貼壁生長,;
型表面含有含氮官能團,,能促進某些細(xì)胞(如細(xì)胞)的貼壁、生長和分化,。
按瓶子外形分為:
寬體培養(yǎng)瓶,;
三角培養(yǎng)瓶;
斜頸培養(yǎng)瓶,。
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