細(xì)胞培養(yǎng)瓶根據(jù)形狀的不同有直頸,、斜頸,、角度頸、三角形、矩形等種類,,規(guī)格包括25ml,、75ml、175ml,、250ml,,其中小規(guī)格的多用于細(xì)胞傳代、保存細(xì)胞,、為實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞等用途,。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的分類:
培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式,有直頸,、斜頸,、角度頸、三角形,、矩形,。
直頸:可以減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋里;
斜頸:易于傾注,,移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體,;
角度頸:移液管或者細(xì)胞刮易于進(jìn)入瓶身,并且可減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋,;
三角形:移液管或細(xì)胞刮更易達(dá)到瓶角,,寬底增加穩(wěn)定性;
矩形:斜頸的矩形培養(yǎng)瓶瓶底至瓶頸是一個(gè)坡度設(shè)計(jì),,易于傾注,,移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體,大部分斜頸瓶都有一個(gè)裙邊以增加穩(wěn)定性,。
直頸和角度頸的矩形培養(yǎng)瓶整個(gè)瓶底都是培養(yǎng)面,,節(jié)省空間并減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋,。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,,底部無(wú)畸變;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜),;
設(shè)計(jì)的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn),;
側(cè)面可疊放,更有效地利用培養(yǎng)箱,;
無(wú)毒,,無(wú)DNA/RAN酶;
伽馬射線消毒滅菌,。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長(zhǎng)期培養(yǎng),、傳代、作為種子細(xì)胞。
不易污染,。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實(shí)驗(yàn)中選用,,臨時(shí)培養(yǎng)。
培養(yǎng)面積T25約為25,,T75為75,。
6孔板、10/孔,。
12孔板4/孔,。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于,安全系數(shù)的高低,、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的多少,。
個(gè)人感覺(jué)培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高,操作也比較方便,。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來(lái)做相對(duì)大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細(xì)胞,。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對(duì)照分析實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,,已基本上飽和,,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng),同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng)),。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法。
同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程,。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
具體操作步驟如下:
將長(zhǎng)滿細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去,。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞,。
隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,,當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化,。
一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,,分到另外兩到三瓶中,,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無(wú)Ca2+,、Mg2+的Hank’s液溶解,,濾器過(guò)濾除菌,4℃保存,,用前可在37℃下回溫,。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使終濃度達(dá)0.02%,。
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