細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,顧名思義就是用來培養(yǎng)細(xì)胞的,。
根據(jù)材質(zhì)可以分為玻璃的和塑料的,,底部形狀有正方形,、長方形,、三角形等,,根據(jù)瓶子容積有5至500ml供選擇。
另外,,表面經(jīng)過改性處理后,,可以讓細(xì)胞更好的進(jìn)行貼壁培養(yǎng),這樣根據(jù)細(xì)胞貼壁面積又可以分為25~175cm2多種,。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長成致密單層后,,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長,,同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法,。
同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程,。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶,。
具體操作步驟如下:
將長滿細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去,。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中,。
瓶口塞好橡皮塞,,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。
隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,,當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化,。
一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,,分到另外兩到三瓶中,,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng),。
第二天觀察貼壁生長情況,。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),,加入100ml無Ca2+,、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,,4℃保存,,用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA,,使終濃度達(dá)0.02%,。
培養(yǎng)瓶主要分類
按細(xì)胞對產(chǎn)品的貼壁要求分為三類:
普通型適合細(xì)胞和組織的懸浮培養(yǎng);
標(biāo)準(zhǔn)型具有良好的細(xì)胞貼壁性能,,適用于細(xì)胞的貼壁生長,;
型表面含有含氮官能團(tuán),能促進(jìn)某些細(xì)胞(如細(xì)胞)的貼壁,、生長和分化,。
按瓶子外形分為:
寬體培養(yǎng)瓶;
三角培養(yǎng)瓶,;
斜頸培養(yǎng)瓶,。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長期培養(yǎng)、傳代,、作為種子細(xì)胞,。
不易污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實(shí)驗(yàn)中選用,,臨時(shí)培養(yǎng),。
培養(yǎng)面積T25約為25,T75為75,。
6孔板,、10/孔,。
12孔板4/孔。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于,,安全系數(shù)的高低,、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的多少。
個(gè)人感覺培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高,,操作也比較方便。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來做相對大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細(xì)胞,。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對照分析實(shí)驗(yàn),。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,底部無畸變,;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜),;
設(shè)計(jì)的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn);
側(cè)面可疊放,,更有效地利用培養(yǎng)箱,;
無毒,無DNA/RAN酶,;
伽馬射線消毒滅菌,。
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