細(xì)胞和組織的體外培養(yǎng)已成為生命研究和實(shí)踐的必不可少內(nèi)容。
培養(yǎng)的細(xì)胞類型繁多,,從病毒到和,從人體細(xì)胞到動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞,。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的分類:
培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式,,有直頸、斜頸,、角度頸,、三角形、矩形,。
直頸:可以減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋里,;
斜頸:易于傾注,移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體,;
角度頸:移液管或者細(xì)胞刮易于進(jìn)入瓶身,,并且可減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋,;
三角形:移液管或細(xì)胞刮更易達(dá)到瓶角,寬底增加穩(wěn)定性,;
矩形:斜頸的矩形培養(yǎng)瓶瓶底至瓶頸是一個(gè)坡度設(shè)計(jì),,易于傾注,移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體,,大部分斜頸瓶都有一個(gè)裙邊以增加穩(wěn)定性,。
直頸和角度頸的矩形培養(yǎng)瓶整個(gè)瓶底都是培養(yǎng)面,節(jié)省空間并減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋,。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng),,同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法,。
同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程,。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶,。
具體操作步驟如下:
將長(zhǎng)滿細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中,。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞,。
隨著時(shí)間的推移,,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,,加入10ml培養(yǎng)液終止消化,。
觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化,。
一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘,。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無(wú)Ca2+,、Mg2+的Hank’s液溶解,,濾器過(guò)濾除菌,,4℃保存,用前可在37℃下回溫,。
胰酶溶液中也可加入EDTA,,使終濃度達(dá)0.02%。
培養(yǎng)瓶主要分類
按細(xì)胞對(duì)產(chǎn)品的貼壁要求分為三類:
普通型適合細(xì)胞和組織的懸浮培養(yǎng),;
標(biāo)準(zhǔn)型具有良好的細(xì)胞貼壁性能,,適用于細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng);
型表面含有含氮官能團(tuán),,能促進(jìn)某些細(xì)胞(如細(xì)胞)的貼壁,、生長(zhǎng)和分化。
按瓶子外形分為:
寬體培養(yǎng)瓶,;
三角培養(yǎng)瓶,;
斜頸培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,,底部無(wú)畸變,;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜);
設(shè)計(jì)的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn),;
側(cè)面可疊放,,更有效地利用培養(yǎng)箱;
無(wú)毒,,無(wú)DNA/RAN酶,;
伽馬射線消毒滅菌。
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